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生物安全柜的正确使用(胡国庆)

发布时间:2020-07-23 06:20  

  生物安全柜的正确使用胡国庆浙江省疾病预防控制中心为什么关注实验室生物安全?三起SARS疫情后期的实验室感染事件2003年9月8日: 新加坡国立大学实验室, 在P3实验室同时开展西尼罗病毒与SARS病毒的研究, 一位27岁华人研究员感染;2003年12月6日: 台湾省国防大学预防医学研究所, 一名47岁的中校研究员, 在P3实验室内清理SARS实验后的废弃物时, 未戴手套, 因而感染;2004年4月22日: 中国CDC病毒所, 跨室开展SARS病毒研究, 并引发三代、 9例 病例、 1例死亡; 另有两例 “隐性” 感染者。我们应该知道的实验室生物安全管理规定《实验室生物安全手册》 ;《微生物和生...

  生物安全柜的正确使用胡国庆浙江省疾病预防控制中心为什么关注实验室生物安全?三起SARS疫情后期的实验室感染事件2003年9月8日: 新加坡国立大学实验室, 在P3实验室同时开展西尼罗病毒与SARS病毒的研究, 一位27岁华人研究员感染;2003年12月6日: 台湾省国防大学预防医学研究所, 一名47岁的中校研究员, 在P3实验室内清理SARS实验后的废弃物时, 未戴手套, 因而感染;2004年4月22日: 中国CDC病毒所, 跨室开展SARS病毒研究, 并引发三代、 9例 病例、 1例死亡; 另有两例 “隐性” 感染者。我们应该知道的实验室生物安全管理规定《实验室生物安全手册》 ;《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则》 ;《实验室生物安全通用要求》 ;《生物安全实验室建设技术规范》 ;《病原微生物实验室生物安全管理条例》 ;《可感染人类的高致病性病原微生物菌(毒) 种或样本运输管理规定》 ;《人间传染的病原微生物名录》 ;《医疗机构临床实验室管理办法》 ;《病原微生物实验室生物环境管理办法》 ;实验室生物安全防护技术 屏障隔离技术; 定向气流技术; 消毒灭菌技术; 个人防护技术。实验室生物安全防护分级生物安全防护(bio-safety containment) 是指避免生物危险因子, 特别是对生物体包括实验室工作者在内的人员的伤害和对环境的污染的意识和措施。 实验室生物安全防护分为一级防护/屏障(primary barriers) 和二级防护/屏障(secondary barriers) 。一级防护/屏障(primary barriers) 包括两方面: ①生物安全柜(biological safety cabinet, BSC) 和类似的设备等; ②个人防护装备(personal protective equipment, PPE) 。二级防护/屏障(secondary barriers) 指实验室屏障设施, 各种一级与二级组合成不同防护水平级别的实验室。生物安全柜(Bi ol ogi cal safety cabi nets, BSCs)是用于各类生物安全实验室从事实验诊断和原代培养物、 菌毒株及其他检测样本等具有感染性的生物材料的操作, 具有保护操作者、 实验环境以及实验样品的安全防护设备。生物安全柜是实验室生物安全的一级安全隔离屏障,ag亚洲集团! 也是实验室最为关键的安全防护设备。生物安全柜最主要和关键的部件是高效空气过滤器(HEPA) 。中国医疗卫生消毒网 《生物安全柜》 定义和普通排风柜/通风柜的区别排风柜的作用:把污染空气排出实验室, 主要针对化学污染;结构上:没有高效过滤装置;操作区没有很好的密闭性;排风柜不能应急替代生物安全柜的作用。如果把Ⅰ 级生物安全柜用于理化检测, 排风应外接到室外。和净化工作台/超净台的区别净化工作台只保护检测样品;净化工作台不能代替生物安全柜;生物安全柜可以实现净化工作台的作用。安全柜根据气流及隔离屏障设计结构分为Ⅰ 、 Ⅱ 、 Ⅲ三个等级。Cl ass I 级生物安全柜Cl ass II 级生物安全柜, 具体分为:Class II Type A1 型生物安全柜Class II Type A2 型生物安全柜Class II Type B1 型生物安全柜Class II Type B2 型生物安全柜Cl ass III 级生物安全柜一、 生物安全柜(一) I级生物安全柜前窗操作口向内吸入的负压气流保护人员的安全; 排出气流经高效过滤器过滤后排出保护环境不受污染。 不要求对检测样品的保护。经过样品区的空气, 经高效过滤器过滤后100%排放到实验室环境中。用途: 用作特殊的密封设备(如离心、 收获设备或小的发酵设备) 或可能产生气溶胶的操作过程(如通气培养或组织搅拌) 。 相当于安全通风柜。I级生物安全柜改进型反向的水平层流气体流速: 0.4m/sYY 0569-2005要求:0.7~1.0m/s中国医疗卫生消毒网 有前窗操作口的安全柜, 操作者可以通过前窗操作口在安全柜内进行操作; 对人员、 产品和环境进行保护。前窗操作口向内吸入的负压气流保护人员;经高效过滤器过滤的垂直下降气流保护产品;污染气流经高效过滤器过滤后排出保护环境;Ⅱ 级安全柜按排放气流占系统总流量的比例及内部设计结构分A1、 A2、 B1、 B2四种类型。(二) Ⅱ 级生物安全柜Ⅱ 级A1型生物安全柜前窗操作口流入气流的最低平均流速为0. 40m/s;下降气流为安全柜的部分流入气流和部分下降气流的混合气体, 经过高效过滤器过滤后送至工作区;污染气流经过高效过滤器过滤后可以排到实验室或经安全柜的外排接口 通过排风管排到大气中: 70%气体循环使用, 30%排到室内或室外;安全柜内的污染部位可以处于正压状态,并且这些正压区域可以 没有负 压区域包围。不能用于有挥发性有毒化学品和挥发性放射性核素的实验。Ⅱ 级A2型生物安全柜前窗操作口流入气流的最低平均流速为0.50m/s。下降气流为部分流入气流和部分下降气流的混合, 经过高效过滤器过滤后送至工作区。污染气流经过高效过滤器过滤后可以排到实验室或经安全柜的外排接口通过排风管道(软连接)排到大气中。 70%循环使用, 30%外排。安全柜内所有污染部位均处于负压状态或者被负压通道和负压通风系统环绕。用途:用于进行以微量挥发性有毒化学品和痕量放射性核素为辅助剂的微生物实验时, 必须连接功能合适的排气罩。应用最广泛; 回风道为负压, 并且通过排风管道将安全柜排出的气体引入室外,即使排风HEPA泄露时也不会导致对操作人员造成危险。Ⅱ 级B1型生物安全柜前窗操作口流入气流的最低平均流速为0. 5m/s;下降气流大部分由未污染的流入气流循环提供, 经过高效过滤器过滤后送至工作区。大部分被污染的下降气流经过高效过滤器过滤后通过专用的排气管道(硬连接) 排入大气中;70%气流经过滤后外排(要求排到室外) 、 70%外界空气补充、 30%气流经过滤后循环使用。Ⅱ 级B1型生物安全柜用途安全柜内所有生物污染部位均处于负压状态或者被负压通道和负压通风系统包围。如果挥发性有毒化学品或放射性核素随空气循环不影响实验操作或实验在安全柜的直接排气区域进行, B1型安全柜可以用于以微量挥发性有毒化学品和痕量放射性核素为辅助剂的微生物实验。Ⅱ 级B2型生物安全柜(全排式)前窗操作口流入气流的最低平均流速为0. 50m/s;下降气流来自经过高效过滤器过滤的实验室或室外空气(即安全柜排出的气体不再循环使用) ;流入气流和下降气流经过高效过滤器过滤后通过专用排气管道(硬连接) 排到大气中, 不允许回到安全柜和实验室中;100%气流经过滤后外排;100%外界空气补充;无循环使用的气流。中国医疗卫生消毒网 Ⅱ 级B2型生物安全柜用途所有污染部位均处于负压状态或者被直接排气( 不在工作区循环) 的负压通道和负压通风系统包围。B2型安全柜可以用于以挥发性有毒化学品和放射性核素为辅助剂的微生物实验。适用于生物安全1、 2、 3级的样品。A型和B型生物安全柜的区别和使用以挥发性有毒化学品和放射性核素为辅助剂的微生物实验。适用生物安全1、 2、 3级的样品无全排全部流入气流0. 5B2微量挥发性有毒化学品和痕量放射性核素为辅助剂的微生物实验。30%大部分流入气流0. 5B1微量挥发性有毒化学品和痕量放射性核素为辅助剂的微生物实验, 必须连接功能合适的排气罩。室外0. 5A2不能用于有挥发性有毒化学品和挥发性放射性核素的实验70%室内或室外部分流入气流和部分污染气流0. 4A1用途循环风比例排风方式下降气流构成流入气流类型(三) Ⅲ级生物安全柜具有全封闭、 不泄露结构的通风柜;没有开放式观察窗。人员通过与柜体密闭连接的手套在安全柜内实施操作;安全柜内对实验室的负压应不低于120Pa;下降气流经高效过滤器过滤后进入安全柜。排出气流经两道高效过滤器过滤或通过一道高效过滤器过滤再经焚烧处理。100%气流经过滤后外排进入环境; 100%外界空气补充; 无循环使用的气流。 流入风速: 0. 7m/sIII级生物安全柜为操作4级生物安全水平的微生物病原体设计。III级安全柜通常只是在最高围护功能的实验室内安装, 这些实验室具有控制出入和特殊通风要求或其它支持系统(例如高压蒸汽) 。Ⅲ级生物安全柜的使用用于操作危险度4级的微生物材料,可以提供最好的个体防护。所有接口都是密封的(只有通过连接在柜上的结实的橡胶手套,手才能伸到工作台面) ,其送风经HEPA过滤,排风则经过两个HEPA过滤器。三级生物安全柜性能比较(四) 生物安全柜的选购中国医疗卫生消毒网 生物安全柜医疗器械注册证生物安全柜相关标准EN 12469: 2000Biotechnology-Performance criteria for microbiological safety cabinets (生物技术 微生物安全柜性能标准)NSF/ANSIbiosafety cabinetry(Ⅱ 级(层流) 生物安全柜)49: 2004 ClassⅡ (laminarflow) YY 0569-2005《生物安全柜》 (2006-06-01)JG170-2005《生物安全柜》 :建设部发布。生物安全柜的选用原则IIIB1, B2是是是BSL 4 II(A1, A2,B1, B2)是是是BSL 1-3 I是不是BSL 1-3 环境产品人员应选用的生物安全柜级别提供保护对象估计的生物危险级别1、 II级生物安全柜内的准备工作(1) 开始工作前, 准备材料检查清单, 在生物安全柜内放置好必要的材料, 在正式工作时减少手臂穿越气幕的次数; 调整凳子高度, 使自己的脸在前操作口之上。(2) 操作者手臂应垂直于安全柜的操作口, 进出时缓慢移动, 避免破坏气流屏障。 手臂放进安全柜内大约1分钟后才能实验操作。(3) 不要把操作者的胳膊横放在前面的格栅上; 前面的格栅绝对不能让研究记录、 废弃的塑料包装和吸液装置等阻挡。 所有的操作应在距离前面格栅4英寸里面的工作面上进行。(3) 室内其他人员的活动也会影响安全柜的空气保护屏障。(五) 生物安全柜的使用中国医疗卫生消毒网 、 工作前的自净和消毒(1) 在工作前要让生物安全柜的风机至少运行3-5分钟, 使柜内的空气实现自净。(2) 安全柜的工作台面、 内壁(不包括送风滤器扩散板) 和观察窗的内表面用消毒剂擦拭。 消毒后再用无菌蒸馏水进行擦拭以清除残余消毒剂。(3) 放到安全柜的容器和材料的表面使用70%乙醇擦拭, 以减少将环境的杂菌带到安全柜内。(4) 定期对孵箱和冰箱进行消毒。3、 安全柜内材料放置和操作在安全柜的工作台面上可以放一块塑料衬底的能吸水的毛巾。所有材料应放在离安全柜前面的格栅和后面工作台面的边缘尽可能远的位置。容易产生气溶胶的设备(如旋转搅拌器, 台式离心机)应靠近安全柜的后部放置。操作时的动作应从工作台面的清洁区到污染区。洁净培养物(左边) 可以进行接种(中心) ; 用过的污染吸管放在浅的平底盘里, 而其它污染的材料可以放在生物危害包(右边) 中。 这安排对于习惯于左手操作的人要颠倒过来。4、 II级生物安全柜内的操作 在生物安全柜内所进行的许多普通过程可能产生喷溅或气溶胶。 应该始终采用良好的微生物学技术, 减少喷溅和气溶胶产生。 II级生物安全柜的设计可以使水平方向喷出的孢子在14英寸的传播距离以内被安全柜向下流动的气流所俘获。保持干净的材料离开产生气溶胶的活动区至少1英尺以外将会减少交叉污染的可能性。因此,5、 工作结束时的表面消毒 工作完成时, 所有的容器和设备应该进行表面消毒并拿出安全柜。 在每天工作结束时, 应该对安全柜进行最后的表面消毒, 包括工作台面、 安全柜的边壁、 后壁和观察窗玻璃内部的擦拭。 如果必要, 安全柜也应进行放射性检测并进行必要的消毒。 作为安全的微生物学操作的最后步骤, 操作者应该摘下手套、 脱下工作服并且洗手。6、 发生少量喷洒时的消毒 在生物安全柜内发生少量的喷洒时, 应用污染清除吸收纸巾立即进行处理, 并将使用过的纸巾放到生物危害包里。 对安全柜内的所有物品和安全柜内部, 用浸满消毒液的毛巾立即进行擦拭消毒。7、 发生大量溢出时的消毒 当发生大量的溢出时, 液体会通过前面或后部的格栅流到下面去, 这时要求更广泛的消毒。 安全柜内的所有的物品应该进行表面消毒并拿出安全柜。 使消毒液维持20-30分钟的适当接触时间。 如果溢出的液体含有放射性材料, 可采取类似的程序。 并应该与辐射安全人员联系, 寻求特殊的指导。中国医疗卫生消毒网 (六) 生物安全柜的检测要求根据WS 233-2002《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则》 的相关规定: 有下列情况之一时, 必须对Ⅱ 级生物安全柜进行现场检测 :1、 实验室施工时, Ⅱ 级生物安全柜搬放到指定位置后。2、 Ⅱ 级生物安全柜被移动位置后。3、 对Ⅱ 级生物安全柜进行检修后。4、 Ⅱ 级生物安全柜更换高效过滤器后。5、 Ⅱ 级生物安全柜一年一度的常规现场检测。检测项目和方法垂直下降气流速度断面测定;工作窗口流入气流风速测定;气流流向检测(发烟物) : 生物安全柜、 实验室内高效过滤器检漏;生物安全柜泄露(非必测) ;照明、 噪声、 振动等检测;(七)生物安全柜的日常维护1. 定期清洁操作台面和前窗玻璃;2. 保持室内空气质量, 延长高效过滤器使用寿命;3. 定期检测紫外灯的照射强度, 及时更换灯管;4. 长期不用应定期进行维护性运行;6. 高效过滤器应定期检测, 及时更换;5. 做好使用和维护记录。谢谢!联系方式:E-mail: 欢迎到中国医疗卫生消毒网下载标准、 规范和课件!中国医疗卫生消毒网消毒论坛下载标准、 规范和课件中国医疗卫生消毒网